链霉亲和素在细胞分离技术中的应用
瑞禧生物2025-02-11   作者:ws   来源:
字号大小:

链霉亲和素(streptavidin,SA)是与亲和素(avidin,AV)有相似生物学特性的一种蛋白质,是streptomyces avidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似,等电点6.0,非特异性结合远比亲和素低。

链霉亲和素 

1.免疫磁珠分离法

原理:将链霉亲和素与磁珠共价偶联,制成链霉亲和素磁珠。当磁珠与生物素化的抗体或细胞表面的生物素化标志物结合后,在磁场的作用下,可实现细胞的分离。

应用:

阳性分选:如从外周血单个核细胞中分离出特定的Lymph 细胞亚群,先使用生物素化的抗体标记目的细胞,再加入链霉亲和素磁珠,使目的细胞与磁珠结合,然后通过磁场将结合磁珠的目的细胞分离出来,可富集 10000 倍,纯度高、回收率高、操作迅速简便。

阴性分选:用于去除细胞混合物中的非目的细胞,如在tumour细胞研究中,可先使用生物素化的抗体标记非tumour细胞,然后加入链霉亲和素磁珠将其去除,从而获得相对纯净的tumour细胞群,适用于缺乏针对目的细胞的特异性抗体等情况。

 

2.链霉亲和素微泡分离法

原理:链霉亲和素微泡是一种表面包被有链霉亲和素的高浮力微球,利用其与生物素的特异性结合,可捕获生物素化的细胞等目标分子,然后基于微泡的浮力,使结合的目标分子漂浮到样品容器的表面,从而实现分离。

应用:可以从复杂的生物样品中分离出各种生物素化的细胞,如blood细胞、tumour细胞、干细胞等,具有操作简单、温和、无需复杂设备等优点,能够保持细胞的活性和生理功能,可用于细胞生物学研究、诊断等领域。

 

3.亲和层析法

原理:将链霉亲和素固定在层析柱的固相载体上,当含有生物素化细胞或生物素化细胞提取物的样品通过层析柱时,生物素化的细胞或细胞成分会特异性地与链霉亲和素结合,而其他杂质则被洗脱,从而实现细胞或细胞成分的分离纯化。

应用:可用于从组织细胞裂解物中分离特定的细胞亚群或细胞表面蛋白等,在蛋白质组学研究、细胞信号通路研究等方面具有重要应用,有助于获得高纯度的细胞或蛋白样品,为后续的分析和研究提供基础。

 

4.荧光激活细胞分选(FACS)

原理:先使用生物素化的抗体标记细胞,然后加入荧光素标记的链霉亲和素,使细胞表面带有荧光标记,再通过流式细胞仪根据细胞的荧光特性对细胞进行分选,将带有特定荧光标记的细胞分离出来。

应用:应用于细胞生物学、免疫学、血液学等领域,如分离不同发育阶段的细胞、特定表面标志物表达的细胞亚群等,可用于研究细胞的分化、免疫细胞的功能等。