文献：Improved efficacy of doxorubicin delivery by a novel dual-ligand-modified liposome in hepatocellular carcinoma

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作者：Xiaocheng Li , Wenbin Diao , Hantao Xue , Fei Wu , Weiyu Wang , Bin Jiang , Jingkun Bai, Bo Lian , Weiguo Feng , Tongyi Sun , Wenjing Yu, Jingliang Wu, Meihua Qu, Yubing Wang, and Zhiqin Gao

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DSPE-PEG2000-NH2磷脂-聚乙二醇2000-氨基

DSPE-PEG2000-NHS 磷脂-聚乙二醇2000-活性酯

GA 甘草次酸

原文摘要：Liposomes have been widely used as drug carriers in both biomedical research and

for clinical applications, allowing the stabilisation of therapeutic compounds and overcoming obstacles to cellular and tissue uptake. However, liposomes still have low targeting efficiency, resulting in insufficient killing of tumour cells and unnecessary damage to normal cells. In this study, glycyrrhetinic acid (GA) and peanut agglutinin (PNA) were used as ligands to prepare dual-ligand-modified doxorubicin-loaded liposomes (DOX-GA/PNA-Lips) to enhance the targeting accuracy and efficacy of drug delivery against malignant liver cancer. PNA and GA modification enhanced the binding ability of liposomes to liver cancer cells, leading to excellent tissue and cell

targeting of DOX-GA/PNA-Lips. DOX-GA/PNA-Lips showed an effective anti-tumour effect in vivo and in vitro, with its targeted delivery facilitating attenuation of the toxic side effects of DOX. These results demonstrated that dual-ligand-modified liposomes may provide an effective strategy for the treatment of hepatocellular carcinoma.

DSPE-PEG2000-NHS是一种具有活性酯基团的磷脂-聚乙二醇衍生物。其中，DSPE提供了良好的脂质体形成能力和细胞膜亲和性，使其能够与生物膜有效结合。PEG2000作为中间连接段，具有良好的水溶性和生物相容性，可增加分子在水溶液中的稳定性和流动性。而NHS活性酯基团则能够与含有氨基的生物分子或药物发生特异性共价结合反应，从而实现对这些物质的修饰或偶联，常用于制备靶向药物递送系统、生物传感器等；DSPE-PEG2000-NH2同样是一种重要的磷脂-聚乙二醇衍生物。氨基则赋予了该化合物反应活性。氨基可与含有羧基、活性酯等官能团的物质发生化学反应，实现与生物活性分子、药物、纳米材料等的偶联。在生物医学领域，DSPE-PEG2000-NH2常被用于构建多功能药物载体，通过与不同的功能分子偶联，实现药物的靶向输送、控释等多种功能，同时也可用于生物分子的固定化和修饰。 该文献研究以甘草次酸（GA）和花生凝集素（PNA）为配体，制备双配体修饰的阿霉素负载脂质体（DOX-GA/PNA-Lips）。具体制备过程如下：

图：双配体修饰的脂质体及其靶向组织的机制示意图

DSPE-PEG2000-GA 和DSPE-PEG2000-PNA合成

将DSPE-PEG2000-NH2溶于氯仿中，然后加入 GA、 EDC和 DMAP。搅拌该溶液，并在室温下孵育。随后，用纯水洗涤有机相。加入无水硫酸钠干燥有机相，并通过减压浓缩溶液。将溶液与无水醚混合进行沉淀。产物被溶解并沉淀。最后，得到了DSPE-PEG2000-GA。

PNA用 PBS（pH 7.4）溶解。将DSPE-PEG2000-NHS在加热条件下（在水浴中）加入到溶液中，直到完全溶解。将溶液在室温下搅拌，然后将溶液转移到透析袋中进行纯化。将溶液冻干得到DSPE-PEG2000-PNA。

脂质体的制备

采用薄膜分散法制备空白脂质体（Lips）。将大豆卵磷脂和胆固醇溶解在氯仿中。DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA、DSPE-PEG2000-GA、DSPE-PEG2000-PNA，或两者均不添加到不同类型的脂质体中。然后蒸发溶剂以去除氯仿，并使用旋转蒸发器形成脂质膜。随后用硫酸铵溶液水合脂质膜，用超声细胞破碎器将溶液均质。脂质体通过过滤器挤压三次后获得。按照上述方法，加入DSPE-PEG2000-GA和DSPE-PEG2000-PNA，制备目标修饰的脂质体。采用硫酸铵梯度法制备了负载dox的脂质体（DOX-Lips）。简单地说，空白脂质体是从上一步中获得的。将脂质体与DOX溶液混合，在旋转蒸发器中孵育。然后透析溶液以去除游离的DOX；透析后获得DOX脂质体。

图：(a)DSPE-PEG2000-GA的合成过程，(b)DSPE-PEG2000-PNA的合成过程

结论：DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG2000-NH2、GA参与制备的DOX-GA/PNA-Lips在体内和体外均显示出抗tumor作用，其靶向递送有助于减弱DOX的有害副作用。PNA和GA修饰增强了脂质体与liver cancer细胞的结合能力，导致DOX-GA/PNA-Lips具有良好的组织和细胞靶向性。