‌‌FRET（荧光能量共振转移）‌是一种通过蛋白质相互作用来确定两个蛋白之间的距离及其动态变化的实验技术。当两个融合蛋白之间的距离在5-10纳米之间时，供体荧光蛋白（如‌CFP）发出的荧光可以被受体荧光蛋白（如‌YFP）吸收，从而激发受体荧光蛋白发出荧光。这种效应反映了两个蛋白是否直接相互作用及其强度。‌

具体原理

FRET效率依赖于供体与受体间的距离以及供体和受体的物理特性，如供体量子产率、受体消光系数、光谱重叠等。供体分子发射谱与受体分子吸收光谱需有相当部分的重合，一般重合大于30%时才能检测到FRET效应。此外，供体分子与受体分子的偶极取向和空间距离也会影响FRET效率。

荧光共振能量转移是两个荧光染料之间存在的现象。举例说明：Cy3可以被550nm绿光激发，发射650nm的红光。Cy5刚好可以被650nm光激发，发射700nm近红外光。那么，当Cy3和Cy5距离很近时（距离小于10nm），用Cy3的激发光550nm照射，此时溶液整体发Cy5的700nm近红外光。

FRET需要2个条件：

①两个荧光染料距离足够近（小于10nm）；

②第一个荧光染料的发射光谱与第二个荧光染料的激发光谱存在明显重叠。