6-FAM，即 6 - 羧基荧光素（6-Carboxyfluorescein），是荧光素类有机化合物。拥有荧光素的基本骨架，在第 6 位碳原子上连接了羧基。这个羧基赋予它化学活性，使其能与多种生物分子发生反应，实现标记效果。6-FAM（6 - 羧基荧光素）标记技术在细胞生物学研究中有应用，主要包括以下几个方面：

图：6-FAM结构式

一、细胞内生物分子标记与追踪：

1. 核酸研究：6-FAM 可以标记寡核苷酸、引物等，用于实时荧光定量 PCR（qPCR），通过与目标 DNA 序列特异性结合，实时监测 PCR 反应过程中 DNA 的扩增情况，从而实现对基因表达水平的定量检测；还可用于荧光原位杂交（FISH）技术，标记核酸探针，检测和定位染色体、细胞核空间、细胞和组织样品中特定核酸序列。

2. 蛋白质研究：利用 6-FAM NHS ester（6 - 羧基荧光素琥珀酰亚胺酯）能够与蛋白质中的氨基基团发生共价连接的特性，将荧光标记引入蛋白质分子。这使得蛋白质在荧光显微镜或荧光光谱仪下能够被检测和追踪，可用于研究蛋白质在细胞内的定位、转运、相互作用以及动态变化等。

3. 其他生物分子标记：如标记脂肪酸等小分子，像 6-FAM - 花生四烯酸，可用于观察花生四烯酸在细胞内的分布、运输及代谢过程，从而揭示其在细胞生长、分化、apoptosis等过程中的作用机制。

二、细胞功能研究：

1. 细胞周期分析：通过标记细胞内特定的与细胞周期相关的蛋白或核酸，利用流式细胞术分析不同细胞周期阶段细胞的荧光信号，从而了解细胞周期的进程和调控机制。

2. 细胞apoptosis检测：在细胞apoptosis过程中，一些核酸片段会发生变化。用 6-FAM 标记的核酸探针可以结合到这些特定的核酸片段上，通过荧光显微镜或流式细胞术观察荧光信号的变化，来检测细胞apoptosis的发生和程度。

3. 细胞内离子浓度检测：例如钙离子，可将 6-FAM 与钙离子指示剂结合，当细胞内钙离子浓度发生变化时，6-FAM 的荧光信号也会相应改变，进而实现对细胞内钙离子浓度动态变化的监测。

三、细胞间相互作用研究：

1. 免疫细胞相互作用：标记免疫细胞表面的抗原或受体，观察免疫细胞之间、免疫细胞与靶细胞之间的相互作用过程，如 T 细胞与抗原呈递细胞的结合、NK 细胞对tumour细胞的识别等。

2. 细胞黏附与迁移研究：标记细胞表面的黏附分子或细胞骨架蛋白，研究细胞在黏附、迁移过程中这些分子的动态变化，以及细胞与细胞外基质之间的相互作用。

四、化合物研发与细胞内化合物作用机制研究：

1. 化合物筛选：将 6-FAM 标记在化合物分子上，如 6-FAM-PTX（6 - 羧基荧光素标记的紫杉醇）、6-FAM-MTX（6 - 羧甲基荧光素标记甲氨蝶呤），通过荧光标记实现对化合物分子的高灵敏度检测，观察化合物在细胞内的摄取、分布和代谢情况，筛选出具有良好细胞摄取和作用效果的化合物候选物。

2. 化合物作用机制研究：通过追踪标记化合物在细胞内的位置变化和与细胞内靶点的结合情况，研究化合物对细胞内信号通路、代谢过程、细胞结构等方面的影响，深入了解化合物的作用机制。